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内标战外标文库

2019-07-28

  内标和外标_化学_天然科学_专业材料。什么叫内标法?如何选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方式。 正在阐发测定样品中某组分含量时, 插手一种内标物质 以校谁和消弭出于操做前提的波动而对阐发成果发生的影响,以提高阐发成果的精确度。

  什么叫内标法?如何选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方式。 正在阐发测定样品中某组分含量时, 插手一种内标物质 以校谁和消弭出于操做前提的波动而对阐发成果发生的影响,以提高阐发成果的精确度。 内标法正在气相色谱定量阐发中是一种主要的手艺。 利用内标法时, 正在样品中插手必然量的标 准物质,它可被色谱拄所分手,又不受试样中其它组分峰的干扰,只需测定内标物和待测组 分的峰面积取相对响应值,即可求出待测组分正在样品中的百分含量。采用内标量时,内 标物的选择是一项十分主要的工做。 抱负地说, 内标物该当是一个能获得纯样的己知化合物, 如许它能以精确、 已知的量加到样品中去, 它该当和被阐发的样品组分有根基不异或尽可能 分歧的物理化学性质(如化学布局、极性、挥发度及正在溶剂中的消融度等)、色谱行为和响应 特征,最好是被阐发物质的一个同系物。当然,正在色谱阐发条什下,内标物必需能取样品中 各组分充实分手。需要指出的是,正在少数环境下,阐发人员可能比力关怀化台物正在一个复杂 过程中所获得的收受接管率, 此时, 他能够利用一种正在这种过程中很容易被完全收受接管的化台物做 内标,来测定感乐趣化合物的百分收受接管率,而不必遵照以上所说的选择准绳。 正在利用内标量时, 有哪些要素会影响内标和被测组分的峰高或峰面 积的比值? 影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的要素次要有化学方面的、 色谱方面的和仪器方面的 三类。 由化学方面的缘由发生的面积比的变化常常正在阐发反复样品时呈现。 化学方面的要素包罗: 1、内标物正在样品里夹杂欠好; 2、内标物和样品组分之间发生反映, 3、内标物纯度可变等。 对于一个比力成熟的方式来说, 色谱方面的问题发生的可能性更大一些, 色谱上常见的一些 问题(如渗漏)对绝对面积的影响比力大,对面积比的影响则要小一些,但若是绝对面积的变 化已大到脚以使面积比发生显著变化的程度, 那么必然有某个主要的色谱问题存正在, 好比进 样量改变太大,样品组分浓度和内标浓度之间有很大的不同,检测器非线性等。进样量应脚 够小并连结不变,如许才不致于形成检测器和积分安拆饱和。若是认为方式比力靠得住,而色 谱固看来也是一般的话,应着沉查抄积分安拆和设置、斜率和峰宽定位。对积分安拆发生怀 疑的最无力的是:面积比可变,而峰高比连结相对恒定, 正在制做内标尺度曲线时应留意什么? 正在用内标法做色谱定量阐发时, 先配制必然分量比的被测组分和内标样品的夹杂物做色谱分 析,丈量峰面积,做分量比和面积比的关系曲线,此曲线即为尺度曲线。正在现实样品阐发时 所采用的色谱前提应尽可能取制做尺度曲线时所用的前提分歧,因而,正在制做尺度曲线时, 不只要说明色谱前提(如固定相、柱温、载气流速等),还应说明进样体积和内标物浓度。正在 制做内标尺度曲线时, 各点并不完全落正在曲线上, 此时应求出头具名积比和分量比的比值取其平 均位的尺度误差,正在利用过程中应按期进行单点校正,若所得值取平均值的误差小于 2,曲 线,则应沉做曲线,若是曲线正在铰短期间内即发生变更,则不宜利用内 标量。 外标法 用待测组分的纯品做对照物质, 以对照物质和样品中待测组分的响应信号比拟较进行定量的 方式称为外标法。 此法可分为工做曲线法及外标一点法等。 工做曲线法是用对照物质配制一 系列浓度的对照品溶液确定工做曲线,求出斜率、截距。正在完全不异的前提下,精确进样取 对照品溶液不异体积的样品溶液,按照待测组分的信号,从尺度曲线上查出其浓度,或用回 归方程计较,工做曲线法也能够用外标二点法取代。凡是截距应为零,若不等于零申明存正在 系统误差。工做曲线的截距为零时,可用外标一点法(间接比力法)定量。 外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中 i 组分的含量。将对照品溶液取 样品溶液正在不异前提下多次进样,测得峰面积的平均值,用下式计较样品中 i 组分的量: W =A(W)/(A) 式中 W 取 A 别离代表正在样品溶液进样体积中所含 i 组分的分量及响应的峰面积。(W)及(A) 别离代表正在对照品溶液进样体积中含纯品 i 组分的分量及响应峰面积。外标法方式简洁,不 需用校正因子,非论样品中其他组分能否出峰,均可看待测组分定量。但此法的精确性受进 样反复性和尝试前提不变性的影响。此外,为了降低外标一点法的尝试误差,应尽量使配制 的对照品溶液的浓度取样品中组分的浓度附近。 外标法 external standard method 色谱阐发中的一种定量方式, 它不是把尺度物质插手到 被测样品中, 而是正在取被测样品不异的色谱前提下零丁测定, 把获得的色谱峰面积取被测组 分的色谱峰面积进行比力求得被测组分的含量。 外标物取被测组分同为一种物质但要求它有 必然的纯度,阐发时外标物的浓度应取被测物浓度相接近,以利于定量阐发的精确性。 定量阐发中如何选择内标法或外标法 选一取欲测组分附近但能完全分手的组分做内标物(当然是样品中没有的组分),然后 配制欲测组分和内标物的夹杂尺度溶液,进样得相对校正因子。再将内标物插手欲测组 分的样品中,进样后测得欲测组分和内标物的定量参数。用内标法公式计较即可。 内标法是将必然量的纯物质做内标物,插手到精确称量的试样中,按照被测试样和内标 物的质量等到其响应的色谱峰面积之比,来计较被测组分的含量。 选择内标物有 4 个 要求:1.内标物应是该试样中不存正在的纯物质;2.它必需完全溶于试样中,并取试样中 各组分的色谱峰能完全分手;3.插手内标物的量应接近于被测组分;4.色谱峰的应 取被测组分的色谱峰的附近,或正在几个被测组分色谱峰两头。 内标法的长处是测 定的成果较为精确,因为通过丈量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计较的, 因此正在必然程度上消弭了操做前提等的变化所惹起的误差。内标法的错误谬误是操做法式较 为麻烦,每次阐发时内标物和试样都要精确称量,有时寻找合适的内标物也有坚苦。 外标法简洁,但进样量要求十分精确,要严酷节制正在取尺度物不异的操做前提下进行, 不然形成阐发误差,得不到精确的丈量成果。 内标取外标都是定量的一种方式罢了,至于哪一种方式好取欠好不克不及一概而论,做分歧 的阐发,面临着分歧的要求,再加上阐发成本阐发效率等等问题,我想简单而无效进行 定量阐发来满脚要求才是最主要的。 1、以前做过良多医药、农药两头体的芳喷鼻族卤代化合物的常量定量阐发,没有从动进 样器,用外标量,确实沉现性取不变性很是差,成果经常遭到搞合成同事的质疑。 其实,细心阐发缘由不必然就是外标法不适合这种定量阐发,起首我们的尝试室仪器和 手段能否调整到一种不变而合理的形态了,好比,衬管能否干净,玻璃棉的能否合 适得当(可否使样品尽可能的汽化)、汽化温度能否合适、色谱峰形能否对称(也就是 样品取色谱柱健合相能否婚配) 、 附近有没有其它色谱峰的干扰、 选用什么进样体例 (如 快速进样仍是热针进样)等等要素的影响都需要考虑,若是这些要素都考虑了,按照 G MP 方式验证对于细密度的要求, 统一样品进 6 针以上的 RSD 和配制 6 个样品的定量结 果 RSD 都能满脚小于 1.5%的要求,那么这个方式用外标法就是完全合用的,可是前面 的影响要素是必然要都考虑到的,不然谈论这个方式能否合用就有失偏颇了。正在做过的 很多出口产物的定量阐发方式傍边有很多是一些医药公司供给的比力完美而验证过的 方式,内标取外标都有(他们用的都是从动进样)细密度都能满脚 RSD 小于 1.5%的要 求,当一个方式可以或许满脚测试要求的时候,无论内标外标,都是可行的,当然有一个分 析成本和阐发时间的问题,内标的成本和节制溶液、样品溶液的配制当然要比外标要高 和麻烦一些了。而有些时候,可能受你尝试室现有仪器和从属设备的影响,达不到必然 的要求,而还必需进行定量阐发,有时外标的成果可能就要差一些,这时,你可能就要 考虑用内标法了,能够解除手动进样的误差、分流蔑视的影响、包罗一些未知要素平行 误差的影响,这时内标可能就显示出它的劣势来了。 2、曾经提到当做方式验证的时候,当统一样品配制 6 个样品溶液用所选用的外标 法进行定量的时候,RSD 都满脚 1.5%的要求时,也分为两种环境,小于 1%和大于 1% 小于 1.5%。若是 RSD 的成果小于 1%,那这个方式就没有什么能够思疑的了;若是 R SD 的成果大于 1%而正在 1.5%略低一些的范畴勾当时, 这个方式的可行性就将遭到质疑, 终究这是方式验证,你就要考虑 1 所提到的影响要素的影响了,若是解除掉以上的 影响要素,RSD 仍是正在 1.5%附近,就要测验考试内标了,若是内标成果的 RSD 很好,就 证明你的这个方式受尝试前提的影响很大,只能用内标了,或者干脆将原方式做大的变 动,再测验考试用外标法测试。 3、而对于微量阐发,好比农药和兽药残留的阐发、阐发等,按照分歧的限量尺度 要求对于细密度的要求也比常量阐发的要求要宽松的多,RSD 有时能够答应达到 10% 以至更高,这时可能外标法有更大的使用空间。 4、单从细密度方面去考虑,解除其它成本和效率的要素,小我认为仍是内标优于外标。 已经做过一个两头体二氨基丙醇的常量定量阐发, 以二乙醇胺为内标, RTX-5 amine (碱 改性) 15m*0.32mm*1.0um 色谱柱阐发,将配制好的节制溶液(含有内标物)从动进 样器进 6 针, 目标物 (二氨基丙醇) 取内标物 (二乙醇胺) 峰面积比率的 RSD 为 0.18%, 而只对这六针样品的目标物峰(二氨基丙醇)面积求 RSD,成果为 0.71%,通过这一实 例的成果大师就会发觉到底哪个方式细密度更好了,当然是内标更好了。当然这个化合 物的检测方式最初按照的验证数据用内标和外标定量都是能够的,尝试室能够 选择。但内标取外标细密度成果的差别是明显存正在的现实。 结论:使用外标法可以或许满脚要求,首选仍是外标法了,终究简单而省事。对于细密度 要求比力高、成果精确度会发生严沉影响、尝试室前提不是很抱负的等等前提下,用内 标法仍是需要的。无论使用那种方式,方式的验证和确认都是很主要的,只需是按照程 序颠末验证和确认的方式,都有其使用的空间的。 外标法 用被测化合物的纯品做为尺度样品,配制成一系列的已知浓度的标样。 注入色谱柱的到其响应值(峰面积)。 正在必然范畴内,标样的浓度取响应值之间存正在较好的线性关系,即 W=f×A,制成尺度曲 线。 正在完全不异的尝试前提下,注入未知样品,获得欲测组分的响应值。 按照已知的系数 f,即可求出欲测组分的浓度。 外标法的长处: 操做、计较简单,是一种常用的定量方式。 无需各组分都被检出、洗脱。 需要标样。 标样及未知样品的测定前提要分歧。 进样体积要精确。 内标法操做: 将已知量的内标样插手尺度样品, 制成夹杂标样, 并配制一系列的已知浓度的工做标样。 夹杂标样中标样取内标样的摩尔比不变。 注入色谱柱,以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值。 按照响应值取工做标样浓度之间存正在的线性关系,即 W=f×A,制成尺度曲线。 将已知量的内标样插手未知样品,注入色谱柱,获得欲测组分的响应值。 按照已知的系数 f,即可求出欲测组分的浓度。 内标法的特点: 操做过程中样品和内标是夹杂正在一路注入色谱柱的,因而只需夹杂溶液中被测组分取内 标的量的比值恒定,上样体积的变化不会影响影响定量成果。 内标法抵消了上样体积,甚至流动相、检测器的影响,因而比外标法切确